新疆理化所开发出可用于石榴皮单宁鞣花酸分离纯化的低成本印迹技术
分子印迹是一种基于“锁钥原理”,通过模仿生物细胞中酶与底物间的特异性作用,人工合成具有特异选择性材料的新兴技术。目前被广泛应用于传感器的制作、催化剂合成以及固相萃取中。传统的非共价印迹由于在预聚物形成过程中,目标分子与功能单体间主要作用力为较弱的超分子作用力(如氢键、疏水作用、π-π堆积等),模板利用率很低,因此合成过程中需要消耗大量的模板分子。对于一些溶解性能较差或极难获得的化合物而言,印迹成本很高。
近年来,生物细胞内的“大分子拥挤”现象引起了科研人员的广泛关注。研究认为,在酶和底物的结合过程中,细胞质中的一些分子,如多糖、蛋白质等的存在会造成空间“拥挤”效应,减少了酶与底物的自由度,从而促进了酶与底物的相互结合。利用这一原理,在印迹过程中降低模板消耗量,可得到较好的印迹效果,从而降低印迹成本。
中国科学院新疆理化技术研究所新疆特有药用资源利用重点实验室的科研人员以聚苯乙烯为拥挤试剂,利用原位聚合法成功合成了鞣花酸印迹整体柱并做了相关色谱评价。研究结果显示,当极少量模板被利用时(模板:单体为1:120,通常为1:2~1:30),印迹整体柱获得了很好的印迹效果(图1);甚至当模板单体达到1:960,仍然具有印迹效果。科研人员进一步以本体聚合法合成了大量印迹聚合物,并对其应用前景做了相关探索。实验表明,利用该技术可从复杂的石榴皮粗提物中一步分离出鞣花酸,且在保证纯度的情况下,回收率达到了80% (图2)。该技术模板消耗量极少,具有较好的应用前景。
相关研究已发表在Analytical and Bioanalytical Chemistry上。该研究工作得到新疆高技术发展项目以及国家自然基金新疆联合基金重点项目等支持。
图1:大分子拥挤环境下模板:单体比例效应
图 2:a.石榴皮粗提物b.淋洗部分c.洗脱部分d.鞣花酸对照品在Thermo Scientific Acclaim TM120 C18柱上色谱效果图